2切片厚度50~100nm為宜:太薄反差低;太厚反差好,但結(jié)構(gòu)重疊,電子束不能穿透;,3切片應(yīng)耐電子束的強(qiáng)烈照射,不變形不升華;,4切片能夠適當(dāng)被染色,保證一定的反差;,5切片均勻,無影響拍照的皺褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不僅能夠自動(dòng)識(shí)別Gatan公司電鏡拍攝的dm3、dm4、Tif文件中的標(biāo)尺、放大倍數(shù)、儀器型號(hào)等信息,還能夠?qū)D片中進(jìn)行上偽色突出對(duì)比度、選區(qū)傅里葉變換、劃線取向灰度分析等。
沿管壁緩慢加入戊二醛預(yù)固定液,不要沖擊細(xì)胞團(tuán),靜置30min后可送樣,請(qǐng)?jiān)?~10℃保存或運(yùn)輸,嚴(yán)禁結(jié)冰(太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使樣品結(jié)冰,冬季寧可常溫送樣),細(xì)胞高速離心收集方法,本方法過去被大多數(shù)單位采用,沒有“GT2”時(shí)的應(yīng)急取材也可使用,各儀器公司的拍攝控制軟件是比較專業(yè)化的處理工具,能夠在處理基本粒徑分析、晶面間距等測量外,還能夠進(jìn)行傅里葉變換、降噪處理等,得到更加深入的數(shù)據(jù)結(jié)果。
鋨酸是強(qiáng)氧化劑,固定脂類、膜結(jié)構(gòu),有電子染色作用,3脫水,用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑取代組織和細(xì)胞中的游離態(tài)水分,使之能與包埋劑混合,脫水要徹底,更換液體動(dòng)作要迅速,脫水時(shí)間不宜過長,且固定后的樣品要充分漂洗,4滲透、包埋與聚合,4,1滲透,2包埋與聚合,加溫在60℃聚合形成固體基質(zhì),牢固地支撐整個(gè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)或組織,制成適于機(jī)械切割的固體樹脂包埋塊,利于切片,常用玻璃刀、鉆石刀進(jìn)行超薄切片,刀上要裝水槽,并注入槽液。