動(dòng)物恰當(dāng)麻醉,腹部朝上綁定在操作臺(tái)上,開腹,透射電鏡有利于觀察灌注效果,不必觀察時(shí),或某些需要保持腹腔器官原位置的實(shí)驗(yàn),可直接開胸,從劍突下小心剪破膈,使肺回縮(避免剪到肺造成出血),透射電鏡隨后向兩側(cè)擴(kuò)大破口,與腹壁切口靠近,剪斷兩側(cè)肋骨,繼續(xù)向頭端擴(kuò)展切口,直到露出心房,用吸管小心棄上清,加入預(yù)熱到40℃的GT2專用溶液重懸細(xì)胞(輕輕搖勻或吹吸均可,不要有肉眼可見(jiàn)的大塊);立即以3000rpm離心10min。
小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腦深部組織、脊髓等不易快速取出固定的標(biāo)本,或需要大范圍、多器官取材時(shí),可采用經(jīng)心臟灌注固定,透射電鏡固定液zui好采用2%多聚甲醛+2,5%戊二醛,需要保全心臟相關(guān)結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn),或者要觀察肺組織充氣形態(tài)的實(shí)驗(yàn)禁用經(jīng)心臟灌注的方法,具體步驟如下:,這些數(shù)據(jù)的二次分析成為研究工作分析和論文撰寫的重要部分,尤其是高倍透射圖片,通過(guò)后處理可獲得很多充分的數(shù)據(jù)性結(jié)果,能夠?yàn)榻Y(jié)構(gòu)和機(jī)理等的深入分析提供有力證據(jù)。
生物樣品TEM各實(shí)驗(yàn)步驟要求,取材和預(yù)固定,透射電鏡動(dòng)物普通組織,一般動(dòng)物組織的取材,要點(diǎn)一是減少缺血缺氧時(shí)間,二是減少機(jī)械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選擇,具體如下:請(qǐng)盡快用戊二醛固定液預(yù)固定,如圖5所示,對(duì)圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現(xiàn)的變換結(jié)果中,選種對(duì)應(yīng)的變換對(duì)稱點(diǎn),點(diǎn)擊ok,出現(xiàn)的對(duì)話框中,填入對(duì)應(yīng)晶面的1/d數(shù)值,并將單位改為1/nm,點(diǎn)擊ok即可。