該過程控制在1min內完成,(zui好有壓力控制裝置,如果沒有,zui好采用吊瓶,瓶的懸掛高度應通過動物血壓的厘米水柱數值估計,小鼠、大鼠等一般掛在高于動物身體1,5m處,停止鹽水灌注,通過三通管換用固定液繼續灌注(室溫),初始速度與鹽水一致;當動物開始強烈抽搐后,降低流速,透射電鏡從輸液器膠囊觀察窗看,維持每秒2滴,(10)常規手術取材、切割標本,浸泡固定30min后轉入4℃冰箱過夜(此步驟同普通組織取材)。
夾持劍突,將胸廓整體向頭端外翻并固定,充分暴露心臟,(此步為灌注操作的關鍵,針尖務必留在左心室,如果發現穿破室間隔、房室隔或心壁,須繼續小心進針,直到針頭進入升主動脈,然后仍夾持心臟,),灌注預熱到體溫的生理鹽水,同時剪破右心耳放血,直到右心耳流出的液體基本不帶血色,zui好刮取細胞,收集在離心管中,1500rpm離心10min(該參數可按自己的經驗調整,目的是不損傷細胞結構的情況下去掉培養液成分)。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。